El grupo SYM de la UPV viene trabajando desde el comienzo de la pandemia de Covid 19 en la evaluación de la calidad del aire ambiental. Dentro de esta línea de investigación, nos hemos centrado en el estudio de diferentes estrategias de cuantificación de microrganismos incluyendo virus, hongos, bacterias, y otros. Las técnicas en uso más desarrolladas son las aplicadas en hospitales e instalaciones similares. Con la pandemia se vio que en general la calidad del aire se vigilaba más bien poco y no sistemáticamente teniendo información muy fragmentaria y difícil de interpretar. Un aspecto muy desatendido, pero de especial interés es el estudio de la calidad del aire en relación con la carga microbiana. Existen varias razones que pueden justificar este subdesarrollo, principalmente relacionadas con los métodos en uso, los cuales se basan principalmente en técnicas microbiológicas y de cultivo. Estos métodos son efectivos, pero también son lentos con tiempos de respuesta de hasta 4 días, y requieren instalaciones y personal especializado. Otros métodos utilizados para identificar y cuantificar especies microbianas en aire son los moleculares, más concretamente las técnicas de PCR. Aunque estas técnicas tienen ventajas indudables, como alta sensibilidad y versatilidad, requieren a veces etapas de enriquecimiento, reactivos adecuados y equipos y personal especializado que no siempre están disponibles in-situ, ni se justifica su empleo. Por ello, como se desprende de esta breve introducción, actualmente es difícil detectar la presencia de patógenos en aire ambiental, a las concentraciones habituales en entornos donde hay una presencia importante de gente como aulas, hospitales, centros comerciales y similares. Desarrollar métodos de ensayo que aborden la detección sensible, selectiva, en tiempo real e in-situ de patógenos, es un gran desafío. Nosotros estamos interesados en iniciar un estudio con el objetivo de poner a punto un inmunoensayo en formato de tira reactiva, capaz de cuantificar la presencia de niveles bajos de microrganismos patógenos para los seres humanos en aire. Los microorganismos que más se controlan en aire en hospitales son los patógenos más agresivos como hongos, y bacterias. Hasta donde sabemos no existen inmunorreactivos específicos disponibles para su detección, aunque si hay publicados trabajos al respecto, pero la sensibilidad de los ensayos es muy baja. Este trabajo comenzaría identificando aquellos grupos químicos de la superficie celular más característicos de un microorganismo diana para posteriormente producir anticuerpos específicos capaces de ser integrados en un ensayo en flujo lateral de gran sensibilidad. Resolver este primer aspecto requiere identificar marcadores específicos presentes en la superficie celular para cada especie, tanto a nivel bibliográfico como experimental. Después, a partir de estos biomarcadores se podría considerar el desarrollo de inmunorreactivos específicos como anticuerpos monoclonales, policlonales o recombinantes. Una vez se dispusiera de los inmunógenos y de los anticuerpos idóneos, se procederá al desarrollo de ensayos en formato de tira reactiva, micromatriz o similar, dependiendo de si se desea detectar un solo patógeno o varios simultáneamente. El protocolo de trabajo final implicaría muestrear con los equipos actualmente en uso en hospitales, que son muy eficientes, y luego llevar la muestra a la tira reactiva para obtener una lectura de la presencia del patógeno diana y una estimación de su concentración en aire, según el umbral de sensibilidad establecido para el ensayo, en un tiempo de 5 minutos. Todo este trabajo puede llevar varios años. Por lo tanto, en esta solicitud se pretende seleccionar indicadores presentes en la superficie celular del patógeno a partir de un estudio ómico. En paralelo se desarrollará un método de muestreo en aire y de preparación de muestra eficaces. Cabe señalar las siguientes tareas: 1. Establecer el método más idóneo para el muestreo en ambientes representativos. 2. Identificar los marcadores celulares específicos del patógeno/s diana mediante técnicas de proteómica, principalmente cromatografía/ MS y otras auxiliares. 3. El objetivo del proyecto al finalizar el mismo es lograr la identificación de los marcadores celulares más adecuados para su uso como antígenos. Para lograrlo, el trabajo concreto a realizar es: – FISABIO. Seleccionar y aislar el o los patógenos a estudiar en aire. – UPV. A partir de las muestras proporcionadas por FISABIO llevar a cabo estudios de proteómica que permitan seleccionar biomarcadores celulares e identificar una lista de antígenos con los que producir anticuerpos recombinantes específicos y sensibles. Si esta etapa se realizara de manera rápida (en menos de 6 meses) se pasaría a la fase de obtención de inmunorreactivos.